Plasmide Double Nickase (h) alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1: sc-400239-NIC

ATP1A1 code la sous-unité catalytique α1 de la Na⁺/K⁺-ATPase, une ATPase de type P essentielle qui utilise l’hydrolyse de l’ATP pour expulser le Na⁺ et importer le K⁺ à travers la membrane plasmique. En maintenant les gradients ioniques, ATP1A1 contribue au potentiel de membrane au repos, au contrôle du volume cellulaire, au transport actif secondaire et à l’excitabilité, et elle influence des voies de signalisation liées à l’adhésion, à l’organisation du cytosquelette et aux réponses au stress. L’activité de la Na⁺/K⁺-ATPase α1 est centrale pour la physiologie épithéliale et neuronale et participe à des programmes d’homéostasie ionique qui modulent la demande métabolique et la gestion du Ca²⁺. Une fonction ou une expression dérégulée d’ATP1A1 a été associée, dans des contextes pertinents pour la maladie, à des phénotypes d’excitabilité et de transport altérés, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la physiologie membranaire et les interactions entre voies de signalisation.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP1A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP1A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP1A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP1A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.