Plasmide CRISPR d'Activation (h) alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1: sc-400239-ACT

ATP1A1 code la sous-unité catalytique alpha 1 de la Na⁺/K⁺-ATPase, une ATPase de type P qui maintient les gradients électrochimiques en exportant le Na⁺ et en important le K⁺ au cours d’un cycle dépendant de l’ATP. Cette pompe est essentielle au potentiel de membrane, à la régulation du volume cellulaire et au transport actif secondaire, influençant ainsi l’absorption des nutriments, l’excitabilité et l’équilibre ionique des épithéliums. ATP1A1 participe également à des microdomaines de signalisation en interaction avec l’activité des kinases de la famille Src et des voies en aval modulant la prolifération et les réponses au stress. Une dérégulation de la fonction de la Na⁺/K⁺-ATPase a été associée à des altérations de l’homéostasie ionique et de la signalisation dans des physiopathologies cardiovasculaires, neurologiques et rénales, ce qui fait d’ATP1A1 une cible pertinente pour des études mécanistiques dans les cellules humaines.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATP1A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATP1A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATP1A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATP1A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATP1A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.