Plásmido Doble Nickase (h) Alix: sc-400350-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Alix consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Alix (h) y el plásmido de doble nickasa Alix (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PDCD6IP. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Alix Anticuerpo (1A12): sc-53540
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Alix | sc-400350-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Alix | sc-400350-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDCD6IP codifica Alix, una proteína adaptadora asociada a ESCRT que coordina eventos de remodelación de membranas, incluida la biogénesis de cuerpos multivesiculares, la clasificación de carga endosomal y la biogénesis de exosomas. Alix interactúa con componentes de ESCRT-I/III y con socios como TSG101 y CHMP4 para apoyar la abscisión durante la citocinesis, la reparación de la membrana plasmática y la disminución de receptores, vinculándola con las salidas de señalización de factores de crecimiento e inmunitaria. Debido a sus funciones en el tráfico endolisosomal y en procesos de gemación, Alix se estudia con frecuencia en el contexto de la salida viral, la dinámica de membranas relacionada con la autofagia y la homeostasis neuronal. La desregulación del tráfico dependiente de PDCD6IP se ha asociado con alteraciones en la señalización mediada por vesículas extracelulares y en vías de proteostasis relevantes para la biología del cáncer, la neurodegeneración y estados inflamatorios.
Alix El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PDCD6IP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PDCD6IP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PDCD6IP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PDCD6IP alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.