Plásmido Doble Nickase (h) Aldolase B: sc-402714-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Aldolase B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Aldolase B (h) y el plásmido de doble nickasa Aldolase B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ALDOB. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Aldolase B Anticuerpo (C-11): sc-393278
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Aldolase B | sc-402714-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Aldolase B | sc-402714-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALDOB codifica la aldolasa B, una aldolasa de fructosa-bisfosfato que cataliza pasos clave del metabolismo de la fructosa y de la glucólisis/gluconeogénesis al escindir la fructosa-1-fosfato y la fructosa-1,6-bisfosfato en fosfatos de triosa. En el hígado, el riñón y el epitelio intestinal humanos, la aldolasa B favorece el flujo de carbono hacia la producción de energía y las vías biosintéticas, vinculando el procesamiento de la fructosa dietaria con la homeostasis central de los carbohidratos. Las alteraciones en la expresión o la actividad de ALDOB perturban el catabolismo de la fructosa y la señalización metabólica posterior, y se asocian tanto con errores innatos del metabolismo como la intolerancia hereditaria a la fructosa, como con contextos más amplios de desregulación metabólica estudiados en biología de hepatocitos. En consecuencia, ALDOB se utiliza con frecuencia como marcador funcional en la diferenciación hepática y como punto de referencia para investigar programas transcripcionales sensibles a los nutrientes.
Aldolase B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALDOB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALDOB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALDOB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALDOB alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.