Aldolase B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432929

概要

Aldob は、解糖系およびフルクトース代謝（フルクトリシス）に関わる酵素であるアルドラーゼBをコードしており、フルクトース-1,6-ビスリン酸およびフルクトース-1-リン酸を切断してトリオースリン酸を産生します。これにより、糖質分解を下流のエネルギー産生や生合成系へのフラックスと結び付けています。マウスでは、アルドラーゼB活性は主に肝細胞と近位腎尿細管細胞で高く、肝臓でのグルコース恒常性、フルクトース代謝、ならびに絶食・摂食サイクルにおける代謝適応を支えています。ALDOB 機能の破綻は、古典的にはフルクトース処理の障害や、解糖系／糖新生のバランスのより広範な乱れと関連しており、代謝ストレス応答や肝細胞生理の研究において重要です。Aldob はまた、肝臓を中心とした疾患モデルにおいて、解糖系・糖新生・フルクトース駆動性シグナル伝達の経路間クロストークを解析するための扱いやすい節点（ノード）にもなります。

Aldolase B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAldob遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aldob内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aldobのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldolase Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldolase Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aldob欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldolase Bの機能に不可欠なAldobエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aldobゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldolase B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAldolase B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aldob遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldolase B HDRプラスミド（m）および Aldolase B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAldobホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAldob標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。