Aldehyde dehydrogenase 1B1/ALDH1B1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404562-NIC

O ALDH1B1 humano codifica uma aldeído desidrogenase mitocondrial que oxida uma ampla gama de aldeídos endógenos e xenobióticos aos seus correspondentes ácidos carboxílicos usando NAD(P)+, sustentando o equilíbrio redox celular e a desintoxicação de aldeídos. Ao limitar o acúmulo de aldeídos reativos gerados durante a peroxidação lipídica e o metabolismo intermediário, o ALDH1B1 contribui para a homeostase mitocondrial e para a proteção contra o estresse carbonílico. Sua atividade se cruza com o processamento de etanol/acetaldeído, o metabolismo de aldeídos relacionados a retinoides e vias de resposta ao estresse oxidativo que influenciam proliferação, diferenciação e adaptação metabólica. Alterações na expressão de ALDH1B1 e em programas enzimáticos de ALDH têm sido associadas à biologia tumoral e a fenótipos metabólicos, motivando a investigação funcional em modelos de câncer, inflamação e disfunção mitocondrial.

Aldehyde dehydrogenase 1B1/ALDH1B1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ALDH1B1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ALDH1B1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ALDH1B1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ALDH1B1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.