Plásmido Doble Nickase (h) Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1: sc-400782-NIC

El gen humano **ALDH1A1** codifica una aldehído deshidrogenasa citosólica dependiente de NAD(P)+ que oxida aldehídos endógenos y xenobióticos a sus correspondientes ácidos carboxílicos, contribuyendo a la desintoxicación celular y a la homeostasis redox. Desempeña un papel central en el metabolismo de los retinoides al convertir el retinaldehído en ácido retinoico, vinculando la actividad de ALDH1A1 con programas transcripcionales que influyen en la diferenciación y las respuestas al estrés. La expresión y la actividad enzimática de ALDH1A1 se utilizan con frecuencia como lecturas funcionales en estudios de biología epitelial y plasticidad celular, y su regulación alterada se ha asociado con la adaptación metabólica y el manejo del estrés oxidativo en contextos patológicos. Estas propiedades hacen de ALDH1A1 un nodo ampliamente estudiado en vías que controlan la eliminación de aldehídos, la señalización del ácido retinoico y la resiliencia celular.

Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALDH1A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALDH1A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALDH1A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALDH1A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.