Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400782-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ALDH1A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1: sc-398578
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400782-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400782-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes ALDH1A1 kodiert eine zytosolische, NAD(P)+-abhängige Aldehyddehydrogenase, die endogene und xenobiotische Aldehyde zu den entsprechenden Carbonsäuren oxidiert und damit zur zellulären Entgiftung sowie zur Redox-Homöostase beiträgt. Es spielt eine zentrale Rolle im Retinoidstoffwechsel, indem es Retinaldehyd zu Retinsäure umsetzt, wodurch die ALDH1A1-Aktivität mit Transkriptionsprogrammen verknüpft wird, die Differenzierung und Stressantworten beeinflussen. Die Expression und enzymatische Aktivität von ALDH1A1 werden häufig als funktionelle Readouts in Studien zur Epithelbiologie und zellulären Plastizität verwendet, und eine veränderte Regulation wurde in Krankheitskontexten mit metabolischer Anpassung und dem Umgang mit oxidativem Stress in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen ALDH1A1 zu einem breit untersuchten Knotenpunkt in Signalwegen, die Aldehyd-Clearance, Retinsäure-Signalisierung und zelluläre Widerstandsfähigkeit steuern.
Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ALDH1A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ALDH1A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ALDH1A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ALDH1A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.