Plasmide Double Nickase (h) ALB/Albumin: sc-400269-NIC

L’ALB humain code l’albumine, la protéine plasmatique la plus abondante et un déterminant majeur de la pression oncotique. Elle constitue également un principal transporteur d’acides gras, d’hormones stéroïdiennes, de bilirubine et de divers xénobiotiques. Synthétisée et sécrétée principalement par les hépatocytes, l’albumine contribue à la distribution systémique des nutriments, au tamponnement de l’état rédox grâce à son thiol libre, et à la modulation de la biodisponibilité des ligands dans la circulation. L’expression d’ALB est étroitement liée à la différenciation des hépatocytes, aux programmes métaboliques hépatiques et au fonctionnement de la voie de sécrétion, ce qui en fait un marqueur largement utilisé dans les études portant sur l’identité et la maturation hépatiques. Une production ou une distribution altérée de l’albumine est associée à une dysfonction hépatique et à des états inflammatoires systémiques, ce qui souligne sa pertinence pour modéliser les réponses au stress hépatique et l’homéostasie des protéines.

ALB/Albumin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.