Plasmide CRISPR d'Activation (h) ALB/Albumin: sc-400269-ACT

ALB code l’albumine, la protéine plasmatique la plus abondante, synthétisée par les hépatocytes et sécrétée dans la circulation, où elle maintient la pression oncotique (colloïdo-osmotique) et sert de principal transporteur pour les acides gras, la bilirubine, les hormones et de nombreuses petites molécules. L’albumine participe au transport systémique des nutriments et des métabolites, influence l’équilibre rédox via un tamponnement thiol fondé sur la cystéine, et contribue à la disponibilité extracellulaire de ligands pouvant moduler la signalisation métabolique hépatique. L’expression d’ALB est étroitement liée aux programmes de différenciation des hépatocytes et aux réseaux transcriptionnels spécifiques du foie, ce qui en fait un marqueur largement utilisé de l’identité et de la fonction hépatiques. Des niveaux d’albumine altérés et une transcription d’ALB dérégulée sont fréquemment associés à un dysfonctionnement hépatique et sont couramment surveillés dans les études sur les lésions hépatiques, la fibrose et les mécanismes des maladies métaboliques.

ALB/Albumin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ALB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ALB/Albumin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ALB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ALB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ALB/Albumin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ALB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ALB/Albumin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ALB/Albumin dans les cellules tumorales présentant une expression de ALB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.