AKR7A2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403377-ACT

AKR7A2 kodiert eine zytosolische Aldo-Keto-Reduktase, die die NADPH-abhängige Reduktion reaktiver Aldehyde und Ketone katalysiert und damit die zelluläre Abwehr gegen elektrophilen und oxidativen Stress unterstützt. Durch die Entgiftung von Aldehyden, die aus der Lipidperoxidation stammen, sowie von Xenobiotika-Metaboliten trägt AKR7A2 zur Redoxhomöostase und zur Aufrechterhaltung der Integrität des zellulären Proteoms bei. Seine Aktivität greift in Netzwerke der Aldehyd-Entgiftung und in umfassendere Stressantwort-Signalwege ein, die die Anfälligkeit gegenüber Toxinexposition und inflammatorischer Signalgebung mitbestimmen. Eine veränderte Regulation von AKR7A2 wurde in Kontexten untersucht, in denen Carbonylstress und Xenobiotika-Metabolismus krankheitsrelevante Phänotypen beeinflussen, einschließlich Leberfunktionsstörungen und tumorassoziierter Zustände mit oxidativem Stress.

AKR7A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AKR7A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

AKR7A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AKR7A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AKR7A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen AKR7A2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AKR7A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von AKR7A2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des AKR7A2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AKR7A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.