AIP5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403772

Panoramica

WWP1 codifica per la ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT AIP5, un enzima regolatorio che catalizza il trasferimento di ubiquitina su proteine bersaglio per controllarne stabilità, localizzazione e output di segnalazione. AIP5 partecipa alla proteostasi dipendente dall’ubiquitina e può influenzare le cascate di segnalazione di recettori e chinasi, i programmi trascrizionali e le risposte allo stress cellulare attraverso il turnover selettivo dei substrati. Modulando il controllo di qualità proteico e le soglie di segnalazione, l’attività di WWP1 è stata collegata in letteratura a fenotipi cellulari rilevanti per proliferazione, differenziamento e omeostasi epiteliale. La disregolazione delle vie delle ligasi dell’ubiquitina che coinvolgono WWP1 è stata associata a meccanismi rilevanti per la malattia, inclusi alterata trasduzione del segnale e reti aberranti di degradazione proteica studiate in oncologia e in altri disturbi complessi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AIP5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WWP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WWP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WWP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AIP5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WWP1 per lo studio della segnalazione di AIP5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WWP1 critici per la funzione di AIP5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WWP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AIP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AIP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WWP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AIP5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AIP5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WWP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WWP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.