AIP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403772

Übersicht

WWP1 kodiert die HECT-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase AIP5, ein regulatorisches Enzym, das die Übertragung von Ubiquitin auf Proteinsubstrate katalysiert und dadurch deren Stabilität, Lokalisation und Signaloutput steuert. AIP5 ist an der ubiquitinabhängigen Proteostase beteiligt und kann über den selektiven Abbau bestimmter Substrate Rezeptor- und Kinase-Signalkaskaden, transkriptionelle Programme sowie zelluläre Stressantworten beeinflussen. Durch die Modulation der Proteinkontrolle und von Signal-Schwellenwerten wurde die WWP1-Aktivität in der Literatur mit zellulären Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Proliferation, Differenzierung und die Homöostase von Epithelgeweben relevant sind. Eine Fehlregulation von Ubiquitin-Ligase-Signalwegen unter Beteiligung von WWP1 wurde mit krankheitsrelevanten Mechanismen assoziiert, darunter veränderte Signaltransduktion und aberrante Netzwerke des Proteinabbaus, wie sie in der Onkologie und anderen komplexen Erkrankungen untersucht werden.

Das AIP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WWP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WWP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WWP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AIP5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WWP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AIP5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WWP1-Exone abzielen, die für die AIP5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WWP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AIP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AIP5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WWP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AIP5 HDR-Plasmid (h) und AIP5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WWP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WWP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.