adseverin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422815

Panoramica

Scin codifica adseverina, una proteina della superfamiglia della gelsolina che taglia (“severing”) e cappuccia (“capping”) l’actina in modo regolato dal Ca²⁺, rimodellando la dinamica dell’actina filamentosa in maniera dipendente dallo stimolo. Promuovendo una rapida disassemblazione e riorganizzazione dei filamenti di actina, l’adseverina supporta processi quali il traffico di membrana, i cambiamenti di forma cellulare e la secrezione regolata, in particolare in contesti di cellule ematopoietiche e secretorie. La sua attività si intreccia con la segnalazione del calcio e con vie di controllo del citoscheletro che influenzano adesione, migrazione ed esocitosi di vescicole. Un rimodellamento dell’actina deregolato e una secrezione calcio-dipendente alterata sono spesso implicati in fenotipi infiammatori e neoplastici, rendendo Scin un nodo utile per studi meccanicistici della biologia delle malattie legate al citoscheletro in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO adseverin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Scin in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Scin insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Scin a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina adseverin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Scin per lo studio della segnalazione di adseverin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Scin critici per la funzione di adseverin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Scin per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal adseverin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal adseverin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Scin. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal adseverin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR adseverin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Scin per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Scin definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.