ADHγ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402261

Visão geral

ADH1C codifica a subunidade gama da álcool desidrogenase humana (ADHγ), uma oxidorredutase citosólica dependente de zinco que catalisa a oxidação de etanol e de outros álcoois e aldeídos de cadeia curta, dependente de NAD⁺. Essa atividade enzimática sustenta o metabolismo do álcool e de retinoides e se relaciona à homeostase redox celular ao influenciar o balanço NADH/NAD⁺ e as vias subsequentes de processamento de aldeídos. Variações ou desregulação no fluxo metabólico ligado a ADH1C podem modular a carga de acetaldeído e as respostas ao estresse oxidativo, processos implicados em lesão hepática, metabolismo de carcinógenos e fenótipos metabólicos mais amplos. Como parte do cluster de genes ADH, a ADHγ também é relevante para estudos de desintoxicação tecido-específica e de processamento de xenobióticos na biologia hepática e do trato aerodigestivo superior.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ADHγ (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ADH1C em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ADH1C, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ADH1C na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ADHγ.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ADH1C para a investigação da sinalização de ADHγ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ADH1C críticos para a função ADHγ
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ADH1C para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ADHγ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ADHγ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ADH1C. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ADHγ Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ADHγ (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ADH1C para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ADH1C definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.