ADF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417540

概要

ヒトDSTNは、アクチン脱重合因子（ADF）をコードしている。ADFはアクチンに結合する中核的タンパク質であり、Fアクチンを切断および脱重合してフィラメントのターンオーバーを維持し、細胞骨格の恒常性を保つ。アクチン動態を調節することにより、ADFはラメリポディアのリモデリング、エンドサイトーシス、細胞質分裂、細胞移動などの過程を支え、RhoファミリーGTPアーゼシグナル伝達や、コフィリン/ADFの調節的リン酸化ネットワークとも機能的に交差している。アクチン再構築の変化は、上皮バリア機能の破綻、神経形態形成の異常、浸潤性細胞挙動の亢進と関連しており、DSTNは細胞骨格駆動性の疾患表現型を研究するうえで重要な結節点となる。したがってDSTNの摂動は、アクチンフラックスがヒト細胞におけるメカノトランスダクション、接着シグナル、ストレス応答にどのように影響するかを解明するのに有用である。

ADF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDSTN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DSTN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DSTNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ADFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ADFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DSTN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ADFの機能に不可欠なDSTNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DSTNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ADF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびADF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DSTN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ADF HDRプラスミド（h）および ADF HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDSTNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDSTN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。