adenosine deaminase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402201

概要

ヒトADAはアデノシンデアミナーゼをコードしており、細胞質に存在する酵素としてアデノシンおよびデオキシアデノシンの脱アミノ化を触媒し、イノシン誘導体へと変換する。これによりプリン恒常性を維持し、細胞内のデオキシアデノシンヌクレオチドプールを調節している。免疫調節作用をもつアデノシンや、潜在的に細胞毒性を示し得るデオキシアデノシン代謝産物のレベルを制御することで、ADAはリンパ球の発生、増殖、および細胞ストレスや代謝制御に関連するシグナル伝達ネットワークに影響を及ぼす。ADA活性はプリンのサルベージ経路および分解経路と交差し、ヌクレオチドバランス、DNA合成能、さらに免疫組織・非免疫組織におけるアデノシン受容体媒介性シグナル伝達を規定する。ADAの遺伝学的破綻は重篤な免疫不全表現型と関連しており、プリン作動性代謝、免疫細胞の生存性、ならびに代謝産物による遺伝子発現制御を研究するために広く利用されてきた。

adenosine deaminase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるADA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ADA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ADAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、adenosine deaminaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、adenosine deaminaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ADA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• adenosine deaminaseの機能に不可欠なADAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ADAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• adenosine deaminase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびadenosine deaminase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ADA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  adenosine deaminase HDRプラスミド（h）および adenosine deaminase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはADAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のADA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。