ADAR3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402742-ACT

ADARB2 は ADAR3 をコードしており、ADAR3 は神経細胞で豊富に発現する、二本鎖 RNA に結合する RNA 作用型アデノシン脱アミノ化酵素です。ADAR3 は神経系における RNA 編集ダイナミクスの制御と関連づけられています。転写後の遺伝子制御においては、A-to-I RNA 編集が転写産物の安定性、選択的スプライシング、miRNA の標的化、ならびに翻訳される配列の性質に影響し、その結果としてシナプスシグナル伝達や神経細胞の興奮性を形作ります。ADAR3 は一般に ADAR1/ADAR2 と比べて触媒活性が限定的だと考えられていますが、RNA 基質へのアクセスを調節し得ることが示されており、神経発達疾患や精神神経疾患の生物学的理解という文脈で研究されています。ADAR ファミリーの活性に関連する RNA 編集プロファイルの破綻は、さまざまな神経疾患や脳腫瘍で報告されており、ヒト細胞における ADAR3 依存的な RNA 制御の機構研究が促進されています。

ADAR3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADARB2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADAR3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADARB2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADARB2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADAR3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADARB2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADAR3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADARB2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADAR3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。