Plasmide CRISPR d'Activation (m) ADAR1: sc-425147-ACT

Le gène Adar de la souris code ADAR1, une adénosine désaminase agissant sur l’ARN, qui catalyse l’édition A‑to‑I (adénosine en inosine) sur des substrats d’ARN double brin, remodelant le potentiel codant des transcrits, l’épissage et la structure de l’ARN. ADAR1 est un régulateur clé de la détection immunitaire innée en limitant l’activation aberrante des capteurs cytosoliques d’ARN tels que MDA5 et la signalisation en aval de l’interféron de type I, maintenant ainsi l’homéostasie de l’ARN. Par l’édition d’ARNdb endogènes, ADAR1 influence les réponses antivirales, l’hématopoïèse et les programmes transcriptionnels associés au stress, une dérégulation étant liée à des phénotypes inflammatoires et à des interactions tumeur–système immunitaire modifiées dans des systèmes expérimentaux. Par conséquent, Adar est largement étudié dans les voies qui régissent la surveillance de l’ARN, l’expression des gènes stimulés par l’interféron et l’immunité intrinsèque des cellules.

ADAR1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Adar sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAR1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Adar dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Adar, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Adar natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Adar silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.