ADAR1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-425147-ACT

マウスのAdarは、二本鎖RNA基質におけるA-to-I編集を触媒するRNA作用アデノシンデアミナーゼであるADAR1をコードしており、転写産物のコード能、スプライシング、RNA構造を作り替える。ADAR1は、MDA5などの細胞質RNAセンサーや下流のI型インターフェロンシグナルの異常な活性化を抑えることで自然免疫の感知を制御し、RNA恒常性を維持する主要な調節因子である。内在性dsRNAの編集を通じて、ADAR1は抗ウイルス応答、造血、ならびにストレス関連転写プログラムに影響し、その破綻は実験系において炎症性表現型や腫瘍—免疫相互作用の変化と関連する。その結果、AdarはRNA監視、インターフェロン刺激遺伝子発現、細胞内在性免疫を司る経路の研究で広く注目されている。

ADAR1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Adarの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADAR1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Adar 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAdar転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADAR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAdar遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADAR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAdar発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADAR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。