ADAR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401611-ACT

ADAR（ADAR1）は、二本鎖RNA（dsRNA）中でアデノシンをイノシンへ変換する（A-to-I）脱アミノ化反応を触媒するRNA編集酵素をコードしており、転写産物の配列、スプライス部位、ならびにRNA構造を再構成します。内因性dsRNAの編集を通じて、ADAR1は自然免疫のセンシング経路を調節し、異常なインターフェロンシグナルの抑制や細胞質におけるRNA監視機構の制御などに関与します。ADAR1の活性は、細胞状態の遷移、ストレス応答、腫瘍—免疫相互作用に影響する転写後遺伝子制御プログラムにも作用します。RNA編集の破綻やADAR1機能の障害は、インターフェロン異常症やがん関連の表現型と関連づけられており、RNAプロセシングと免疫制御の機構研究における重要な標的となっています。

ADAR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADARの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADAR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADAR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADAR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADAR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADAR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADAR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADAR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADAR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。