ADAM15 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-405627-LAC

ADAM15 codifica uma metaloprotease-disintegrina ancorada à membrana que modula interações célula–célula e célula–matriz por meio de clivagem proteolítica (shedding) e do engajamento de integrinas. A atividade de ADAM15 influencia redes de sinalização ligadas à adesão e à motilidade, incluindo a dinâmica de adesões focais, a remodelação do citoesqueleto e o ajuste de vias de receptores de fatores de crescimento via processamento do ectodomínio de proteínas de superfície. É expressa em múltiplos tecidos e tem sido estudada em contextos de inflamação, biologia vascular e invasão de células tumorais, nos quais alterações na atividade proteolítica e na sinalização de adesão contribuem para fenótipos associados a doenças. Essas propriedades tornam ADAM15 um alvo útil para dissecar a regulação dependente de proteases da migração, da função de barreira e de interações com o microambiente em modelos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ADAM15 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ADAM15 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ADAM15 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ADAM15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ADAM15. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ADAM15 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.