Plasmide Double Nickase (h) ACTR-I: sc-401283-NIC

ACVR1 code le récepteur de l'activine A de type I (ACTR-I/ALK2), un récepteur sérine/thréonine kinase de la superfamille du TGF-β qui transmet les signaux des ligands BMP vers SMAD1/5/8 et les programmes transcriptionnels en aval. Dans les cellules humaines, ACTR-I participe à la régulation de la différenciation ostéogénique et chondrogénique, de la mise en place des tissus (patterning) et des choix de destinée cellulaire via la signalisation BMP–SMAD canonique et des interactions avec la voie MAPK et d'autres voies du développement. Une activité dérégulée d'ACVR1 perturbe la dynamique de la signalisation BMP et est impliquée dans des troubles d'ossification ectopique et du développement squelettique, notamment la fibrodysplasie ossifiante progressive. ACVR1 est également utilisé comme nœud de voie pour étudier l'assemblage des complexes de récepteurs BMP, le contrôle de l'amplitude du signal et des réponses transcriptionnelles dépendantes du contexte.

ACTR-I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACVR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACVR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACVR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACVR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.