ACTG1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400006-NIC

ACTG1は、細胞形状の維持、細胞皮質の張力、ならびに力の発生を支えるアクチン細胞骨格の主要構成要素である細胞質アクチンγ1をコードします。ACTG1は、細胞移動、接着、細胞質分裂、メカノトランスダクションなどの過程の基盤となるアクチンフィラメントの重合とリモデリングに関与し、RhoファミリーGTPaseシグナル伝達やアクチン結合タンパク質ネットワークと統合的に機能します。ヒトの生物学において、ACTG1依存的な細胞骨格ダイナミクスの攪乱は細胞内輸送や細胞構築を変化させ得るため、組織発生やストレス応答の研究において重要です。ACTG1に影響する遺伝的変異や発現制御異常は、細胞骨格に関連する表現型と関連づけられており、感音性難聴の一部や、細胞運動性・細胞構造の変化を伴う疾患などが報告されています。

ACTG1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACTG1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACTG1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACTG1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACTG1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。