ACBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419950

概要

Dbi はアシル CoA 結合タンパク質（ACBP）をコードしており、これは中鎖および長鎖のアシル CoA エステルに結合して細胞内での利用可能性を調節する、保存性の高い脂質シャペロンである。マウス細胞では、ACBP は β 酸化、脂質合成、膜脂質リモデリングに影響を与えることで脂肪酸輸送と代謝恒常性を支え、エネルギーバランスや細胞ストレス応答に関連するシグナル伝達ネットワークを調節し得る。これらの役割を通じて、DBI/ACBP は脂質代謝とミトコンドリア機能、オートファジー、炎症を結び付ける経路において一般的に研究されている。アシル CoA の取り扱いと脂質フラックスの破綻は、代謝機能障害、神経生物学、腫瘍細胞の脂質依存性のモデルに関わるため、Dbi は機構解明研究に有用な標的となる。

ACBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDbi遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dbi内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dbiのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ACBPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ACBPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dbi欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ACBPの機能に不可欠なDbiエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dbiゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ACBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびACBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dbi遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ACBP HDRプラスミド（m）および ACBP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDbiホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDbi標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。