Abin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425441-ACT

O gene Tnip1 de camundongo codifica a ABIN-1 (inibidor de NF-κB ligado a A20), um adaptador ligante de ubiquitina que restringe a sinalização inflamatória a jusante das vias do receptor de TNF, dos receptores do tipo Toll e do receptor de IL-1. A ABIN-1 coopera com a desubiquitinase A20/TNFAIP3 para modular a sinalização por ubiquitina K63 e linear (M1) em complexos que contêm RIPK1 e NEMO/IKK, moldando assim as respostas transcricionais de NF-κB e MAPK. Por meio dessas interações, a ABIN-1 influencia a ativação da imunidade inata, a produção de citocinas e vias de sobrevivência celular, tornando-se relevante para modelos de autoimunidade, doença inflamatória e patologia tecidual dirigida pelo sistema imune. Além disso, a ABIN-1 tem sido associada à regulação de respostas ao estresse celular e pode afetar fenótipos proliferativos em contextos nos quais a sinalização de NF-κB está desregulada.

Abin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tnip1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Abin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tnip1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tnip1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Abin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tnip1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Abin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Abin-1 em células tumorais com expressão de Tnip1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.