Plásmido CRISPR de Activación (m) ABCG1: sc-418933-ACT

El gen **Abcg1** de ratón codifica el transportador ABC de unión a ATP **ABCG1**, un regulador clave de la homeostasis lipídica intracelular que promueve el eflujo de colesterol y fosfolípidos hacia las HDL y ayuda a mantener la composición de la membrana. La actividad de ABCG1 se integra con programas transcripcionales impulsados por LXR/RXR y modula la biología de las células espumosas de los macrófagos, la señalización inflamatoria y el manejo de lípidos en tejidos inmunitarios y metabólicos. Además de sus funciones en macrófagos, ABCG1 contribuye al equilibrio del surfactante pulmonar y a las respuestas celulares al estrés oxidativo y metabólico. Por lo tanto, la expresión o función desregulada de ABCG1 es relevante para estudios de vías relacionadas con la aterosclerosis, la inflamación metabólica y la desregulación lipídica pulmonar en modelos murinos.

ABCG1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Abcg1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABCG1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Abcg1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Abcg1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABCG1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Abcg1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABCG1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABCG1 en células tumorales con expresión de Abcg1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.