AATK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418928

Panoramica

Aatk codifica la tirosin-chinasi associata all’apoptosi (AATK), una chinasi serina/treonina arricchita nel sistema nervoso che supporta la differenziazione neuronale, l’estensione dei neuriti e le decisioni di sopravvivenza durante lo sviluppo e in condizioni di stress. L’attività di AATK si integra con i programmi di segnalazione dell’apoptosi e dei fattori di crescita, influenzando il rimodellamento del citoscheletro e le risposte trascrizionali che determinano il destino cellulare. Un’espressione o una segnalazione di AATK deregolate sono state collegate ad alterazioni della maturazione neuronale e a una maggiore vulnerabilità alla degenerazione, rendendola rilevante per lo studio dei meccanismi neuroevolutivi e della biologia delle malattie neurodegenerative. Nei sistemi murini, Aatk rappresenta un nodo sperimentale maneggevole per analizzare il controllo, dipendente dalle chinasi, della morfologia neuronale e delle vie di morte cellulare indotte dallo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AATK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aatk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aatk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aatk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AATK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aatk per lo studio della segnalazione di AATK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aatk critici per la funzione di AATK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aatk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AATK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AATK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aatk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AATK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AATK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aatk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aatk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.