Plasmide CRISPR d'Activation (h) 17β-HSD3: sc-403863-ACT

HSD17B3 code la 17β‑HSD3, une oxydoréductase microsomale qui catalyse la conversion de l’androstènedione en testostérone, étape clé de la biosynthèse des androgènes, dépendante du NADPH. Cette enzyme agit principalement dans les tissus stéroïdogènes et contribue à réguler les effets de la signalisation du récepteur des androgènes, lesquels influencent le développement sexuel et la physiologie de la reproduction. Une activité altérée de HSD17B3 perturbe l’homéostasie des hormones stéroïdes et a été associée à des troubles du développement sexuel ainsi qu’à une dysrégulation endocrine plus large. Dans les systèmes expérimentaux, HSD17B3 constitue un point d’entrée exploitable pour étudier le métabolisme des stéroïdes, la production intracrine d’androgènes et le dialogue entre les voies stéroïdogènes et les programmes transcriptionnels.

17β-HSD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSD17B3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

17β-HSD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSD17B3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSD17B3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 17β-HSD3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSD17B3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 17β-HSD3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 17β-HSD3 dans les cellules tumorales présentant une expression de HSD17B3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.