γ-GCSc Lentiviral Activation Particles (m): sc-420573-LAC

Gclc kodiert die katalytische Untereinheit der Glutamat‑Cystein‑Ligase (γ‑GCSc), des geschwindigkeitsbestimmenden Enzyms der de‑novo‑Biosynthese von Glutathion, das Glutamat und Cystein zur Bildung von γ‑Glutamylcystein koppelt. Durch die Steuerung der intrazellulären Verfügbarkeit von Glutathion ist γ‑GCSc ein zentraler Regulator der Redoxhomöostase, der Entgiftung reaktiver Sauerstoffspezies sowie zellulärer Antworten auf Xenobiotika und elektrophilen Stress; zudem besteht eine enge Verbindung zu NRF2‑gesteuerten antioxidativen Programmen und zur Empfindlichkeit gegenüber Ferroptose. In Mausmodellen wird eine veränderte Gclc‑Aktivität häufig genutzt, um die Biologie des oxidativen Stresses in Leber, Lunge, Gehirn und Immunzellen zu untersuchen, wobei die glutathionabhängige Pufferkapazität die Mitochondrienfunktion, inflammatorische Signalwege und die metabolische Anpassung beeinflusst. Eine dysregulierte Glutathionsynthese und Gclc‑Expression wurde mit einer erhöhten Anfälligkeit für toxikantinduzierte Schädigungen sowie mit Redoxungleichgewichten in Modellen neurodegenerativer, metabolischer und entzündlicher Erkrankungen in Verbindung gebracht.

γ-GCSc Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Gclc-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

γ-GCSc Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Gclc-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen γ-GCSc-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Gclc-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.