γ-GCSc Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420573-LAC

Gclc codifica a subunidade catalítica da ligase glutamato–cisteína (γ-GCSc), a enzima limitante na biossíntese de novo de glutationa que acopla glutamato e cisteína para formar γ-glutamilcisteína. Ao controlar a disponibilidade intracelular de glutationa, a γ-GCSc é um regulador central da homeostase redox, da desintoxicação de espécies reativas de oxigênio e das respostas celulares a xenobióticos e ao estresse eletrofílico, com fortes vínculos com programas antioxidantes conduzidos por NRF2 e com a sensibilidade à ferroptose. Em sistemas murinos, a alteração da atividade de Gclc é frequentemente usada para modelar a biologia do estresse oxidativo em fígado, pulmão, cérebro e células imunes, onde o tamponamento dependente de glutationa influencia a função mitocondrial, a sinalização inflamatória e a adaptação metabólica. A desregulação da síntese de glutationa e da expressão de Gclc tem sido associada à suscetibilidade a lesões induzidas por tóxicos e ao desequilíbrio redox observado em diferentes modelos de doenças neurodegenerativas, metabólicas e inflamatórias.

As Partículas de Ativação Lentivirais γ-GCSc (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Gclc numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais γ-GCSc (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Gclc, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de γ-GCSc. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Gclc e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.