γ1-Adaptin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403986-NIC

AP1G1 codifica a subunidade γ1-adaptina humana do complexo de proteínas adaptadoras AP-1, um componente central do tráfego vesicular mediado por clatrina na rede trans-Golgi e nos endossomos. A γ1-adaptina ajuda a acoplar sinais de triagem de carga à montagem do revestimento de clatrina, sustentando a formação de transportadores que regulam a reciclagem de receptores, o direcionamento para lisossomos e a distribuição polarizada de proteínas de membrana. Por suas funções na triagem endossomal e no transporte intracelular, AP1G1 influencia a homeostase de receptores de sinalização e a composição de membranas, processos frequentemente investigados em estudos de neurobiologia, imunidade e respostas ao estresse celular. A desregulação da função do complexo adaptador e das vias de tráfego endossomal tem sido associada a fenótipos do desenvolvimento e neurológicos e pode modular a suscetibilidade à entrada e replicação de patógenos, tornando AP1G1 um nó útil para pesquisas mecanísticas de vias.

γ1-Adaptin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AP1G1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AP1G1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AP1G1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AP1G1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.