β3Gn-T2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424741

Panoramica

B3gnt2 codifica β3Gn-T2, una β1,3-N-acetilglucosaminiltransferasi residente nel Golgi che estende le catene di poli-N-acetillattosamina su N- e O-glicani e glicosfingolipidi. Modellando la ramificazione e l’allungamento dei glicani, β3Gn-T2 influenza eventi di riconoscimento mediati da lectine, incluso il legame delle galectine, che può incidere su adesione e migrazione cellulari e sull’organizzazione dei recettori nella membrana plasmatica. La glicosilazione dipendente da B3gnt2 contribuisce alla regolazione della segnalazione immunitaria e infiammatoria e modula la composizione del glicocalice in molteplici tessuti. In letteratura, alterazioni dell’espressione o dell’attività degli enzimi della famiglia β3Gn-T sono state associate a interazioni cellula–cellula disfunzionali e a fenotipi rilevanti per la biologia tumorale e la disfunzione immunitaria, a supporto di studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β3Gn-T2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene B3gnt2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del B3gnt2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto B3gnt2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β3Gn-T2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di B3gnt2 per lo studio della segnalazione di β3Gn-T2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni B3gnt2 critici per la funzione di β3Gn-T2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di B3gnt2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus B3gnt2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β3Gn-T2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR β3Gn-T2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia B3gnt2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio B3gnt2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.