β1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h): sc-402948-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β1-Adaptin Double-Nickase-Plasmid (h) und β1-Adaptin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AP1B1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h) | sc-402948-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402948-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP1B1 kodiert die humane β1-Adaptin-Untereinheit des Adaptorprotein-1(AP-1)-Komplexes, einen zentralen Mantel-Adaptor, der während der Vesikelabschnürung am trans-Golgi-Netzwerk und an Endosomen Frachtproteine mit Clathrin verbindet. Durch das Erkennen von Sortierungsmotiven in zytosolischen Schwanzdomänen koordiniert AP-1 den polarisierten Transport, das Recycling von Rezeptoren und die regulierte Zustellung von Membranproteinen, die die Zellsignalübertragung und die Homöostase prägen. Der β1-Adaptin-abhängige Transport ist mit der endosomalen Sortierung, der Lysosomenbiogenese und dem Umsatz von Membranproteinen verknüpft und beeinflusst damit die epitheliale Polarität und neuronale Funktionen. Störungen von AP1B1 wurden mit erblichen Erkrankungen des intrazellulären Transports in Verbindung gebracht, darunter neuroentwicklungsbezogene Phänotypen und multisystemische Krankheitsmerkmale infolge fehlerhafter Frachtsortierung.
β1-Adaptin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AP1B1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AP1B1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AP1B1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AP1B1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.