α-internexin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402920-ACT

INA codifica a α-internexina, uma proteína de filamento intermediário do tipo IV, enriquecida em neurônios, que se integra à rede de neurofilamentos para sustentar o calibre axonal, a estabilidade do citoesqueleto e o crescimento de neuritos. A α-internexina participa da dinâmica de montagem dos filamentos intermediários e coordena-se com outros componentes do citoesqueleto neuronal durante a diferenciação e a maturação sináptica. A expressão alterada ou a agregação de filamentos intermediários neuronais está ligada a mecanismos relevantes para a neurodegeneração e para lesões do sistema nervoso, incluindo perturbações no transporte axonal e estresse de proteostase. Como marcador associado à linhagem, o INA também é usado para estudar a identidade neuronal e programas de diferenciação em modelos neurais do desenvolvimento e derivados de células-tronco.

α-internexin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de INA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α-internexin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus INA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição INA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α-internexin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus INA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α-internexin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α-internexin em células tumorais com expressão de INA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.