ZO-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400196-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZO-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZO-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ZO-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TJP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ZO-1: sc-33725
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZO-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400196-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZO-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400196-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TJP1 kodiert das Tight-Junction-Gerüstprotein ZO-1, ein Adaptorprotein mit mehreren Domänen, das Claudine und Occludin mit dem kortikalen Aktinzytoskelett verbindet und so die Barrierearchitektur von Epithel- und Endothelgeweben organisiert. ZO-1 koordiniert die Ausbildung von Zellkontakten, Mechanotransduktion und den Umbau des Zytoskeletts über Interaktionen mit Signal- und Polaritätskomplexen und integriert dabei Prozesse wie Zell-Zell-Adhäsion, die Kontrolle der Permeabilität und kontaktabhängige Regulation des Zellwachstums. Störungen der Expression oder Lokalisation von TJP1 sind mit einer Desorganisation der Tight Junctions und einem veränderten parazellulären Transport verbunden – Phänomene, die häufig bei Entzündungen, Fibrose und der Dissemination von Tumorzellen beobachtet werden. Als zentraler Regulator der Stabilität von Zellkontakten wird ZO-1 breit in Signalwegen untersucht, die die Barriereintegrität und epithelial-mesenchymale Dynamiken steuern.
ZO-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TJP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TJP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TJP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TJP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.