Plásmido CRISPR de Activación (h) ZDHHC2: sc-403195-ACT

ZDHHC2 codifica una palmitoiltransferasa de la familia DHHC que cataliza la S-palmitoilación de proteínas diana, modulando su asociación a la membrana, estabilidad, tráfico y competencia de señalización. A través de ciclos dinámicos de palmitoilación, ZDHHC2 contribuye a la regulación del transporte vesicular, la señalización sináptica y relacionada con el sistema inmunitario, y la organización de microdominios de membrana que influyen en la salida de las vías aguas abajo. La alteración de la actividad de ZDHHC2 y de la homeostasis de la palmitoilación se ha asociado con redes de señalización celular desreguladas implicadas en la biología del cáncer y en procesos neurológicos, lo que la convierte en un punto de entrada útil para estudiar cómo las modificaciones lipídicas ajustan la función proteica. Como enzima humana que actúa en membranas, ZDHHC2 se investiga con frecuencia junto con la maquinaria de palmitoilación/despalmitoilación y sustratos específicos de distintas vías para cartografiar las consecuencias funcionales de esta lipidación postraduccional.

ZDHHC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZDHHC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZDHHC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZDHHC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZDHHC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZDHHC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZDHHC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZDHHC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZDHHC2 en células tumorales con expresión de ZDHHC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.