Plásmido CRISPR de Activación (m) ZC3H13: sc-426493-ACT

Zc3h13 codifica ZC3H13, una proteína de unión a ARN con dedo de zinc tipo CCCH que actúa como componente central de la maquinaria asociada al complejo escritor de N6‑metiladenosina (m6A) del ARNm. En células de ratón, ZC3H13 favorece la localización nuclear y sirve de andamiaje para complejos reguladores de m6A, influyendo en el procesamiento co‑transcripcional del ARN, el empalme alternativo, la estabilidad del ARNm y programas de expresión génica vinculados a decisiones de destino celular. A través de estas funciones, ZC3H13 se integra en vías que gobiernan la regulación transcripcional y el control pos‑transcripcional que dan forma al desarrollo y a la homeostasis tisular. La desregulación de componentes de la vía m6A, incluidas redes asociadas a ZC3H13, se ha implicado en estados de diferenciación alterados y firmas transcripcionales relevantes para enfermedades, lo que convierte a Zc3h13 en una diana útil para estudios mecanísticos.

ZC3H13 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Zc3h13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZC3H13 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Zc3h13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Zc3h13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZC3H13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Zc3h13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZC3H13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZC3H13 en células tumorales con expresión de Zc3h13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.