Zap-70 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400826

Übersicht

ZAP70 kodiert Zap-70, eine zytoplasmatische Tyrosinkinase, die für die proximalen Signale des T‑Zell‑Rezeptors (TCR) nach der Phosphorylierung der CD3/ζ‑Ketten durch LCK essenziell ist. Nach der Rekrutierung an phosphorylierte ITAMs phosphoryliert Zap-70 Adapterproteine wie LAT und SLP-76 und koordiniert so den Aufbau von Signalosomen, die die Aktivierung von PLCγ1, Ca²⁺-Flüsse, MAPK-Kaskaden, NF‑κB/NFAT‑Transkriptionsprogramme sowie Zytoskelett‑Remodelling weiterleiten. Diese Signalwege steuern die Selektion von Thymozyten, die Aktivierung und Differenzierung von T‑Zellen sowie deren Effektorfunktionen und verknüpfen die ZAP70‑Aktivität mit der Immunhomöostase. Eine veränderte ZAP70‑Expression oder veränderte Signaldynamik wurde mit Immundefizienz‑Phänotypen und einer fehlregulierten Lymphozytenaktivierung in autoimmunen und hämatologischen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht.

Das Zap-70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZAP70-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZAP70-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZAP70 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Zap-70-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZAP70-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Zap-70-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZAP70-Exone abzielen, die für die Zap-70-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZAP70-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Zap-70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Zap-70 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZAP70-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Zap-70 HDR-Plasmid (h) und Zap-70 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZAP70-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZAP70-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.