Plásmido Doble Nickase (h) Yes: sc-400261-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Yes consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Yes (h) y el plásmido de doble nickasa Yes (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a YES1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Yes Anticuerpo (C-10): sc-46674
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Yes | sc-400261-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Yes | sc-400261-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
YES1 codifica Yes, una tirosina quinasa no receptora de la familia Src que transmite señales desde tirosina quinasas receptoras, integrinas y receptores inmunitarios hacia efectores aguas abajo que controlan la proliferación, la adhesión, la dinámica del citoesqueleto y la supervivencia. Yes participa en vías como la señalización de adhesiones focales, MAPK/ERK, PI3K–AKT y la regulación de STAT, conectando señales extracelulares con programas transcripcionales y metabólicos. La actividad aberrante de YES1 o la ganancia del número de copias se ha asociado con redes de señalización oncogénica alteradas, incluidos cambios en la migración celular y la reconfiguración de quinasas relacionada con resistencia en múltiples contextos tumorales. Como nodo de señalización, YES1 se estudia con frecuencia por su papel en la comunicación cruzada de vías dependiente de fosforilación y en la regulación de la transducción de señales cercana a la membrana.
Yes El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus YES1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de YES1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de YES1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con YES1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.