Plasmide CRISPR d'Activation (h) Yes: sc-400261-ACT

Le gène humain YES1 code la tyrosine kinase non réceptrice Yes, membre de la famille Src, qui relaie les signaux provenant des récepteurs à activité tyrosine kinase et des complexes d’adhésion cellule–cellule/cellule–matrice afin de réguler la prolifération, la survie, le remodelage du cytosquelette et le trafic vésiculaire. Yes participe à des cascades de phosphorylation qui s’entrecroisent avec les voies de signalisation des adhésions focales, MAPK et PI3K, influençant la migration cellulaire et la mécanotransduction. Une signalisation dérégulée de la famille Src, incluant une activité YES1 altérée ou des variations du nombre de copies, a été associée à des phénotypes oncogéniques tels qu’un contrôle anormal de la croissance, l’invasion et des états de signalisation adaptatifs face aux traitements. YES1 est donc largement étudié comme un nœud reliant des signaux proximaux à la membrane à des programmes transcriptionnels et métaboliques dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Yes Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de YES1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Yes Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus YES1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription YES1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Yes. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus YES1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Yes au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Yes dans les cellules tumorales présentant une expression de YES1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.