Particules Lentivirales d'Activation (h) YB-1: sc-401385-LAC

YBX1 code la protéine de liaison à la boîte Y 1 (YB-1), un régulateur se liant à l’ARN et à l’ADN qui coordonne la transcription, l’épissage, la stabilisation et la traduction des ARNm en réponse au stress cellulaire. YB-1 participe à des voies liées au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et au remodelage des complexes ribonucléoprotéiques, influençant des processus tels que la prolifération, l’apoptose et la transition épithélio-mésenchymateuse. Une activité dérégulée de YBX1/YB-1 a été associée à des réseaux de signalisation oncogéniques, à des phénotypes de résistance aux médicaments ainsi qu’à des programmes inflammatoires et fibrosants, ce qui en fait une cible largement étudiée en biologie tumorale et dans les mécanismes d’adaptation au stress. En tant que protéine multifonctionnelle de liaison aux acides nucléiques, YB-1 est fréquemment étudiée pour ses rôles dans la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique et le dialogue entre facteurs de transcription.

Les particules d'activation lentivirales YB-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de YBX1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales YB-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription YBX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de YB-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif YBX1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.