XRCC2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403531-ACT

XRCC2 kodiert ein RAD51-Paralog, der im homologen Rekombinationsweg (HR) an der Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen beteiligt ist und zum Stabilisieren ins Stocken geratener Replikationsgabeln beiträgt. XRCC2 wirkt an der Bildung von RAD51-Filamenten mit und kooperiert mit anderen RAD51-Paralogen, um eine präzise Stranginvasion und die Auflösung von DNA-Schäden zu fördern. Eine Störung von XRCC2 beeinträchtigt die Genomstabilität, erhöht chromosomale Aberrationen und steigert die Empfindlichkeit gegenüber Replikationsstress, was seine Aktivität mit Signalwegen der Zellzyklus-Checkpoints und der DNA-Schadensantwort verknüpft. Varianten oder eine verminderte Funktion von XRCC2 wurden mit vererbten Phänotypen der Genominstabilität und einer erhöhten Krebsanfälligkeit in Verbindung gebracht, wodurch es sich als nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Defekten der DNA-Reparatur eignet.

XRCC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen XRCC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

XRCC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des XRCC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der XRCC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen XRCC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native XRCC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von XRCC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des XRCC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem XRCC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.