XPC Plasmide Double Nickase (h): sc-401499-NIC

XPC codifica la proteina del gruppo C dello xeroderma pigmentosum, un sensore centrale del danno nella riparazione per escissione di nucleotidi del genoma globale (GG-NER) che rileva lesioni del DNA che distorcono l’elica, come i dimeri di pirimidina ciclobutano indotti dai raggi UV e gli addotti chimici voluminosi. Dopo il riconoscimento della lesione, XPC coordina il reclutamento di TFIIH e dei fattori NER a valle per avviare lo svolgimento del DNA, l’escissione e la risintesi, sostenendo così l’integrità del genoma e la stabilità della forcella di replicazione. La funzione di XPC interagisce con la segnalazione del danno al DNA e con il controllo dei checkpoint del ciclo cellulare, influenzando le risposte cellulari allo stress genotossico. Difetti genetici in XPC sono alla base dello xeroderma pigmentosum, gruppo di complementazione C, e sono associati a un aumentato carico mutazionale e a una maggiore sensibilità ai raggi UV e ai mutageni ambientali.

XPC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus XPC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di XPC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di XPC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con XPC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.