Plásmido Doble Nickase (m) xCT: sc-424104-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)xCT consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa xCT (m) y el plásmido de doble nickasa xCT (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Slc7a11. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) xCT | sc-424104-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc7a11 codifica xCT, la subunidad de cadena ligera del antiportador de cistina/glutamato del sistema x_c^-, que importa cistina extracelular a cambio de glutamato intracelular. Al aportar cistina para la biosíntesis de glutatión, xCT sostiene la capacidad celular de amortiguación redox y limita la peroxidación lipídica, vinculando Slc7a11 con las respuestas al estrés oxidativo y la susceptibilidad a la ferroptosis. La actividad de xCT se relaciona con el transporte de aminoácidos, los programas antioxidantes regulados por NRF2 y la homeostasis del glutamato, e influye en la adaptación metabólica bajo limitación de nutrientes. La expresión o la actividad de transporte de Slc7a11 desreguladas se han asociado con una tolerancia al estrés alterada en modelos de cáncer, en contextos de neuroinflamación y en otras condiciones en las que el desequilibrio redox y las vías de muerte celular son resultados experimentales clave.
xCT El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Slc7a11 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Slc7a11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Slc7a11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Slc7a11 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.