xCT Double Nickase Plasmid (h): sc-401920-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das xCT Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- xCT Double-Nickase-Plasmid (h) und xCT Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC7A11 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
xCT Double Nickase Plasmid (h) | sc-401920-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
xCT Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401920-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC7A11 kodiert xCT, die Leichtketten-Untereinheit des Systems xc− (Cystin/Glutamat-Antiporter), das extrazelluläres Cystin im Austausch gegen intrazelluläres Glutamat in die Zelle importiert. Indem xCT Cystin für die Biosynthese von Cystein und Glutathion bereitstellt, unterstützt es die zelluläre Redox-Homöostase und moduliert die Empfindlichkeit gegenüber Ferroptose, die durch Lipidperoxidation angetrieben wird. Die Aktivität von SLC7A11 überschneidet sich mit Programmen der oxidativen Stressantwort, darunter NRF2-regulierte antioxidative Signalwege sowie Netzwerke des Aminosäurestoffwechsels, die die mitochondriale Funktion und den Umgang mit ROS beeinflussen. Eine dysregulierte xCT-Expression wurde mit veränderten metabolischen Abhängigkeiten und Stressadaptations-Phänotypen in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht und macht xCT zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Redox- und ferroptotischen Regulation.
xCT Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC7A11-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC7A11 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC7A11-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC7A11-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.