WT1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400095-NIC

WT1 codifica um fator de transcrição com dedos de zinco que regula a especificação de linhagens, o controlo do ciclo celular e a apoptose, por meio de ativação ou repressão transcricional dependente do contexto. Atua em programas de desenvolvimento, particularmente em tecidos urogenitais e hematopoiéticos, e interage com vias que controlam a diferenciação e a plasticidade epitélio–mesênquima, através da modulação de redes de fatores de crescimento e de regulação transcricional. WT1 também participa no processamento de RNA por efeitos específicos de isoformas no splicing e na ligação a ácidos nucleicos, contribuindo para resultados regulatórios complexos. A expressão desregulada ou mutações em WT1 estão implicadas em múltiplas neoplasias e perturbações do desenvolvimento, tornando-o um marcador amplamente utilizado e um nó mecanístico em estudos de circuitos transcricionais oncogénicos e de regulação do destino celular.

WT1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus WT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de WT1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função WT1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com WT1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.