Plasmide CRISPR d'Activation (h) WISP-1: sc-402559-ACT

WISP1 code pour WISP‑1 (WNT1-inducible signaling pathway protein 1/CCN4), une protéine matricellulaire sécrétée qui module les interactions cellule–matrice, l’adhérence et la migration. En tant que membre de la famille CCN, WISP‑1 intègre le remodelage de la matrice extracellulaire aux voies de signalisation des facteurs de croissance et des intégrines, et est fréquemment étudiée dans le contexte des programmes transcriptionnels pilotés par Wnt/β‑caténine. Parmi ses fonctions rapportées figurent la régulation de l’activation des fibroblastes, des processus ostéogéniques et chondrogéniques, ainsi que des signaux de survie dans les compartiments stromal et épithélial. Une expression altérée de WISP1 a été associée à la fibrose tissulaire, à une réparation aberrante des plaies et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui la rend pertinente pour des études mécanistiques sur l’invasion, l’angiogenèse et la dynamique de la matrice extracellulaire.

WISP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WISP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WISP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WISP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WISP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WISP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WISP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WISP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WISP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de WISP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.