Particules Lentivirales d'Activation (m) Wee 1: sc-423702-LAC

Wee1 murine (Wee1) est une kinase sérine/thréonine conservée qui réprime l’activité de CDK1 par phosphorylation inhibitrice, imposant le point de contrôle G2/M et coordonnant l’entrée en mitose avec l’achèvement de la réplication et de la réparation de l’ADN. En intégrant les signaux de la réponse aux dommages de l’ADN, Wee1 contribue à maintenir la stabilité des fourches de réplication et l’intégrité du génome durant les phases S et G2, en influençant la cinétique du cycle cellulaire, la dynamique de la chromatine et les décisions de destinée cellulaire. Une signalisation Wee1 dérégulée est associée à une altération du contrôle prolifératif et à une adaptation des points de contrôle observées dans des modèles d’instabilité génomique et de biologie des cancers, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes où le stress réplicatif et la compétence des checkpoints façonnent les phénotypes cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales Wee 1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Wee1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Wee 1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Wee1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Wee 1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Wee1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.