Plasmide CRISPR/Cas9 KO WDTC1 (h): sc-411657

Présentation

WDTC1 (également appelé « adipogenesis regulatory factor ») code une protéine contenant des répétitions WD et un domaine TPR, impliquée dans le contrôle du stockage lipidique et des programmes de différenciation des adipocytes. Les fonctions rapportées relient WDTC1 à des mécanismes de régulation dépendants de l’ubiquitine et à des réseaux transcriptionnels qui influencent l’équilibre énergétique cellulaire, avec des effets en aval sur l’expression de gènes adipogéniques et l’homéostasie métabolique. Une activité altérée de WDTC1 a été associée à des phénotypes pertinents pour l’obésité et, plus largement, à une dysrégulation métabolique, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de l’accumulation de graisse et de la signalisation sensible aux nutriments. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de WDTC1 peut aider à explorer les voies qui régissent la biologie des gouttelettes lipidiques, l’adipogenèse et les réponses au stress métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WDTC1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WDTC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WDTC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WDTC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WDTC1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WDTC1 pour l'étude de la signalisation de WDTC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WDTC1 essentiels à la fonction de WDTC1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WDTC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WDTC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le WDTC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WDTC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WDTC1 plasmide HDR (h) et le WDTC1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WDTC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WDTC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.