Plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR24 (h): sc-407847

Présentation

WDR24 code une protéine contenant des répétitions WD qui constitue un composant central du complexe GATOR2, un régulateur clé du contrôle, par la détection des acides aminés, de la signalisation mTORC1. En modulant l’activité de GATOR1, WDR24 contribue à coordonner la disponibilité en nutriments avec l’activation lysosomale de mTORC1, influençant l’autophagie, la synthèse protéique et les programmes de croissance cellulaire. Une perturbation de cet axe peut altérer l’homéostasie métabolique et les réponses au stress, reliant les voies associées à WDR24 à des mécanismes fréquemment étudiés dans le métabolisme du cancer, la neurobiologie et d’autres contextes où une dérégulation de mTORC1 est impliquée. WDR24 est donc pertinent pour disséquer les circuits de signalisation nutritionnelle et leurs conséquences transcriptionnelles et traductionnelles en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR24 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WDR24 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WDR24, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WDR24 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WDR24.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WDR24 pour l'étude de la signalisation de WDR24, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WDR24 essentiels à la fonction de WDR24
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WDR24 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WDR24 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le WDR24 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WDR24. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WDR24 plasmide HDR (h) et le WDR24 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WDR24 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WDR24 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.