Plásmido CRISPR de Activación (h) WDHD1: sc-408824-ACT

WDHD1 (proteína 1 de unión al ADN con repeticiones WD y caja HMG) es un factor conservado de replicación y mantenimiento del genoma que coordina el inicio de la replicación del ADN, la progresión de la horquilla y la respuesta al estrés replicativo. En células humanas, WDHD1 favorece la organización del replisoma y la progresión adecuada de la fase S, conectando la síntesis de ADN con los puntos de control y los procesos de reparación que preservan la integridad del genoma. La expresión o actividad desregulada de WDHD1 se asocia con fenotipos proliferativos y se ha descrito en múltiples contextos de cáncer, en consonancia con su papel en el soporte de un tránsito rápido por el ciclo celular. Como regulador asociado a la cromatina de la dinámica de la replicación, WDHD1 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan la señalización de daño en el ADN, la estabilidad de la horquilla de replicación y la segregación cromosómica.

WDHD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WDHD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

WDHD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WDHD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WDHD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de WDHD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WDHD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de WDHD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía WDHD1 en células tumorales con expresión de WDHD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.