VPS51 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410709

Descripción general

VPS51 codifica una subunidad central del complejo de anclaje GARP (Golgi-associated retrograde protein), asociado al Golgi, que media el tráfico retrógrado desde los endosomas hacia la red trans-Golgi (TGN). Al promover la captura de vesículas y la fusión dependiente de SNARE en la TGN, VPS51 ayuda a mantener la organización del Golgi y favorece el reciclaje adecuado de receptores de clasificación y proteínas de carga. La alteración de la función de GARP perturba la homeostasis endolisosomal, la clasificación de proteínas y las vías de maduración dependientes de la glicosilación, con efectos posteriores sobre las respuestas celulares al estrés. El tráfico retrógrado alterado es relevante en modelos de neurobiología, señalización inmunitaria y fenotipos proliferativos, en los que la integridad del transporte de membrana influye en la disponibilidad de receptores y en las salidas de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VPS51 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VPS51 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VPS51 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VPS51 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VPS51.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VPS51 para la investigación de la señalización de VPS51, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VPS51 críticos para la función de VPS51
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VPS51 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VPS51 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VPS51 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VPS51. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VPS51 (h) y el plásmido HDR VPS51 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VPS51 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VPS51 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.