Plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS26B (h): sc-410249

Présentation

VPS26B code une sous-unité centrale du complexe rétromère de sélection des cargos, qui régule le transport de retour des endosomes vers le Golgi ainsi que le recyclage endosomal des protéines transmembranaires. En coordonnant la reconnaissance des cargos avec la machinerie de tri endosomal, VPS26B contribue au maintien de l’homéostasie des récepteurs, du trafic vésiculaire et de l’intégrité des organites, des processus qui influencent l’amplitude de la signalisation et le renouvellement des protéines membranaires. Les voies associées au rétromère recoupent l’autophagie, la fonction lysosomale et le transport polarisé, ce qui rend VPS26B pertinent pour l’étude de la maintenance neuronale et de la protéostasie en général. Un trafic endosomal dérégulé et un dysfonctionnement du rétromère ont été associés à des phénotypes neurodégénératifs et développementaux, ce qui étaye l’intérêt d’étudier les mécanismes impliquant VPS26B dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS26B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VPS26B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VPS26B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VPS26B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VPS26B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VPS26B pour l'étude de la signalisation de VPS26B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VPS26B essentiels à la fonction de VPS26B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VPS26B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VPS26B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VPS26B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VPS26B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VPS26B plasmide HDR (h) et le VPS26B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VPS26B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VPS26B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.