VPS26B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410249

Übersicht

VPS26B kodiert eine zentrale Untereinheit des cargo-selektiven Retromer-Komplexes, der den Rücktransport von Endosomen zum Golgi sowie das endosomale Recycling von Transmembranproteinen reguliert. Durch die Koordination der Cargo-Erkennung mit der endosomalen Sortiermaschinerie trägt VPS26B zur Aufrechterhaltung der Rezeptorhomöostase, des Vesikeltransports und der Organellenintegrität bei – Prozesse, die die Signalstärke und den Umsatz von Membranproteinen beeinflussen. Retromer-assoziierte Signalwege überschneiden sich mit Autophagie, lysosomaler Funktion und polarisiertem Transport, wodurch VPS26B für die Untersuchung der neuronalen Erhaltung und der allgemeinen Proteostase relevant ist. Fehlregulierter endosomaler Transport und Retromer-Dysfunktion wurden mit neurodegenerativen und entwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was mechanistische Untersuchungen von VPS26B in krankheitsrelevanten Zellmodellen stützt.

Das VPS26B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VPS26B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VPS26B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VPS26B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VPS26B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VPS26B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VPS26B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VPS26B-Exone abzielen, die für die VPS26B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VPS26B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VPS26B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VPS26B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VPS26B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VPS26B HDR-Plasmid (h) und VPS26B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VPS26B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VPS26B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.